产品货号：
BTN14-25420
中文名称：
蜡状芽孢杆菌E33荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Bacillus cereus E33 qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测蜡样芽孢杆菌的试剂盒。
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种地方性，土壤生活的，革兰氏阳性，β溶血性的杆状细菌，它会引起食物中毒，例如"炒饭综合症"(Fried Rice Syndrome)。蜡样芽胞杆菌是需氧型细菌，与其他芽胞杆菌相同，它会产生防御性的内芽孢。蜡样芽胞杆菌与少数食物中毒有关(约2～5%)，包括一些严重的恶心、呕吐以及腹痛，因此快速检测蜡样芽孢杆菌具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：蜡状芽孢杆菌E33荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Bacillus cereus E33 qPCR Kit(SYBR)
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种地方性，土壤生活的，革兰氏阳性，β溶血性的杆状细菌，它会引起食物中毒，例如"炒饭综合症"(Fried Rice Syndrome)。蜡样芽胞杆菌是需氧型细菌，与其他芽胞杆菌相同，它会产生防御性的内芽孢。蜡样芽胞杆菌与少数食物中毒有关(约2～5%)，包括一些严重的恶心、呕吐以及腹痛，因此快速检测蜡样芽孢杆菌具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人蜡样芽孢杆菌高度保守区设计，不会跟其他非蜡样芽孢杆菌的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的染料法荧光定量PCR反应。
- 既可用于定性，也可用于定量。用于定量时线性范围至少5个数量级。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×SYBR qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 超纯水 | 1mL |
| 蜡样芽孢杆菌染料法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 蜡样芽孢杆菌染料法qPCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的1000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可使用本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×ProbeqPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 蜡样芽孢杆菌染料法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL
N+2个待测DNA模板 8μL 不加 不加 超纯水 不加 8μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各8μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 4min PCR反应
(40个循环)95℃ 10sec 60℃ 40sec(采集FAM通道的荧光信号) 溶解曲线分析按 qPCR仪器手册执行
四、数据处理
- 通过溶解曲线分析排除无效数据。如果阴性对照有Ct值，但其溶解曲线跟PCR扩增阳性样品不同，说明是引物二聚体，是假阳性，在分析中当成没有Ct一样，不予以考虑。如果溶解曲线跟阳性一样，说明可能有PCR产物污染，则下步分析数据时，应该剔除比该Ct值大的数据。-
- 如果把本试剂盒用于定量检测，先将Ct值大于PCR扩增阴性对照的数据剔除，不纳入标准曲线制作。以剩下的几个阳性对照样品的浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则Ct比阴性对照Ct值大的可以判断为阴性，Ct比阴性对照Ct值小的可以判断为阳性。
相关搜索：蜡状芽孢杆菌E33荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Bacillus cereus E33 qPCR Kit(SYBR)